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培养基配制步骤

放大字体  缩小字体 发布日期:2024-09-27  来源:网络  浏览次数:25
核心提示:微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异。
微生物培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型,对营养物质的要求也各不相同,加之研究的目的不同,所以培养基的种类很多,使用的原料也各有差异,但从营养角度分析,微生物培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外,培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。为了达到特定要求的研究,需要进行培养基配制和灭菌,那么微生物培养基该如何配制与灭菌呢?

01.计算称量
根据待检样品属性计算出所需的不同培养基的体积,根据说明书进行准确称量;电子天平需开机预热30min后使用,称量过程中手要稳,避免将培养基洒落在天平称量盘中,若洒落,应立即停止称量,使用洁净布擦干粉末,重新调“0”后称量。

02.溶化
对于可溶性淀粉,先用少量冷水调成糊状,再放入沸水中;不易溶解的培养基,先加入少量纯化水振摇溶解后,二次加水配制;需分装的培养基,需完全溶解,含琼脂的培养基需加热融化,完全溶解后,分装至不同容器中进行灭菌。

03.分装
如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免引起杂菌污染。装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。

04.加塞
分装完毕后,需要用硅胶塞堵住管口或瓶口。主要目的是过滤空气,避免污染。不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。塞入管口或瓶口中的硅胶塞,应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿褶皱侵入,塞好后,以手提塞,管、瓶不下落为合适;硅胶塞的2/3应在管内,上端露出少许便于拔取。

05.包扎
塞好塞的试管和锥形瓶应盖上牛皮纸用绳扎紧,同时贴上标签,注明培养基的名称、组别、配制日期后,准备灭菌。

06.灭菌
根据培养基说明书规定的灭菌参数进行灭菌。灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。

温馨提示培养后的平板需经高压灭菌后交由有资质的医疗废弃物公司进行无害化处理
以免造成生物危害!
 

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